ELISA試劑盒的靈敏度該如何判定?

　　ELISA試劑盒的靈敏度判定需結(jié)合以下關(guān)鍵指標(biāo)和方法綜合評估：

　　一、靈敏度的定義與核心指標(biāo)?

　　檢測限(LOD)?

　　指能可靠檢測到目標(biāo)物的低濃度，計算公式為：

　　LOD = 空白信號均值(Sb) + 3 × 空白信號標(biāo)準(zhǔn)差(σ)? ?。

　　實際應(yīng)用中，試劑盒說明書常標(biāo)注“靈敏度"即對應(yīng)LOD(如10pg/mL)?。

　　定量限(LOQ)?

　　可準(zhǔn)確定量的低濃度，計算公式為：

　　LOQ = Sb + 10 × σ? ?。

　　通常要求信號變異系數(shù)(CV)≤20%，確保結(jié)果可重復(fù)?。

　　二、判定方法?

　　標(biāo)準(zhǔn)曲線驗證?

　　選擇低濃度標(biāo)準(zhǔn)品(如LOD附近濃度)，重復(fù)檢測3次，計算信號強(qiáng)度與背景噪聲的比值(S/N≥3為合格)?。

　　加標(biāo)回收率測試?

　　在樣本中添加已知濃度的目標(biāo)物，檢測回收率應(yīng)在80%-120%范圍內(nèi)?。

　　示例：若添加50pg/mL標(biāo)準(zhǔn)品，測得濃度為45-55pg/mL則符合要求。

　　稀釋線性實驗?

　　對樣本進(jìn)行梯度稀釋，檢測信號值與理論值的偏差應(yīng)≤20%?。

　　三、實驗優(yōu)化建議?

　　樣本處理?：避免反復(fù)凍融，離心去除干擾物?。

　　對照設(shè)置?：同步檢測空白對照(僅緩沖液)和陰性樣本，確認(rèn)無交叉反應(yīng)?。

　　數(shù)據(jù)分析?：優(yōu)先選擇線性范圍內(nèi)(R2≥0.99)的數(shù)據(jù)點計算濃度?。

　　四、常見誤區(qū)?

　　混淆“靈敏度"與“檢測范圍"：靈敏度是LOD，而檢測范圍是標(biāo)準(zhǔn)曲線的線性區(qū)間(如30-900pg/mL)?。

　　忽略批間差異：板內(nèi)變異系數(shù)應(yīng)<5%，板間變異系數(shù)應(yīng)<15%?。

　　通過上述方法可系統(tǒng)評估試劑盒靈敏度，確保實驗數(shù)據(jù)的可靠性。

　　注：以上資料僅供參考，如需進(jìn)一步了解產(chǎn)品詳情，可參考品牌供應(yīng)商或技術(shù)老師。

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