以下是關(guān)于人脂聯(lián)素(ADP)ELISA試劑盒的實(shí)驗(yàn)使用說(shuō)明書(shū)綜合整理：

　　BS-1528人脂聯(lián)素(ADP)ELISA試劑盒

　　一、實(shí)驗(yàn)原理

　　采用雙抗體夾心法檢測(cè)樣本中ADP含量。通過(guò)抗-ADP抗體包被微孔板捕獲ADP，再與HRP標(biāo)記的ADP抗體結(jié)合形成復(fù)合物，經(jīng)TMB顯色后測(cè)定450nm吸光度(OD值)，顏色深淺與ADP濃度呈正相關(guān)。

　　二、試劑盒組成

　　組分 規(guī)格(96T) 保存條件

　　預(yù)包被酶標(biāo)板 1×96孔 2-8℃干燥

　　標(biāo)準(zhǔn)品 0.5ml×1瓶(1350μg/L) 2-8℃冷藏

　　酶標(biāo)試劑(HRP標(biāo)記) 6ml×1瓶 2-8℃避光

　　顯色劑A/B液 各6ml×1瓶 2-8℃避光

　　20×濃縮洗滌液 50ml×1瓶 2-8℃冷藏

　　終止液 6ml×1瓶 常溫保存

　　三、樣本處理要求

　　血清/血漿?

　　室溫凝固10-20分鐘后離心(2000-3000rpm，20分鐘)，避免溶血

　　血漿推薦使用EDTA或肝素抗凝

　　細(xì)胞培養(yǎng)上清?

　　直接離心取上清，或PBS稀釋細(xì)胞懸液后凍融裂解

　　組織樣本?

　　需用PBS勻漿后離心，分裝保存于-20℃

　　注意事項(xiàng)?

　　含NaN3的樣本會(huì)HRP活性，需避免使用

　　反復(fù)凍融不超過(guò)3次

　　四、操作步驟(以96孔板為例)

　　標(biāo)準(zhǔn)品稀釋?

　　將1350μg/L標(biāo)準(zhǔn)品按梯度稀釋(如：1350→675→337.5→168.75→84.38→42.19→21.09→0μg/L)

　　加樣孵育?

　　標(biāo)準(zhǔn)品孔/樣本孔各加100μl，37℃孵育120分鐘

　　洗滌?

　　用1:20稀釋的洗滌液洗板5次，每次靜置10-20秒

　　加酶標(biāo)試劑?

　　每孔加HRP標(biāo)記抗體50μl，37℃孵育60分鐘

　　顯色與終止?

　　加TMB底物A/B液各50μl，避光反應(yīng)15分鐘后加終止液50μl

　　五、結(jié)果計(jì)算

　　以標(biāo)準(zhǔn)品濃度為橫坐標(biāo)，OD值為縱坐標(biāo)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線

　　檢測(cè)范圍通常為21.09-1350μg/L，靈敏度可達(dá)0.01μg/ml

　　六、注意事項(xiàng)

　　試劑使用前需室溫平衡30分鐘，濃縮洗滌液結(jié)晶需37℃孵育15分鐘

　　顯色時(shí)間超過(guò)20分鐘可能導(dǎo)致背景過(guò)高

　　不同批號(hào)試劑不可混用

　　注，以上資料僅供參考，如需具體品牌說(shuō)明書(shū)，可參考本生、天正信達(dá)或分細(xì)生物的詳細(xì)文檔。

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